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【干货】B族链球菌(GBS)核酸检测试剂简述

2019-03-21 11:56 ?阅读数:8232 标签:

编者按 

自打小编进入IVD临床试验领域以来,独受致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关试剂的“恩宠”。IVD试剂千千万,总有陌生的挑战,本着对客户负责的态度,对自己提高的要求,就GBS核酸检测试剂作一简述,主要先容GBS的临床背景、产品预期用途及检验原理、同类产品上市情况及异同点、临床试验样本量及研究病例入/排标准等。


临床背景


1、 GBS初步认识


B族链球菌(Group B Streptococcus, GBS)因细胞壁中多糖物质属于抗原构造分类中的B族而得名,单听这个名字并不觉得有什么,就好像说一位凶手叫“春花”,没什么杀伤力。GBS真正的学名又称无乳链球菌,只因它最初引起牧场的奶牛集体得乳房炎,导致畜牧业农场主的严重损失,牧场近乎于瘫痪。20世纪30年代,GBS甚至造成了3例孕妇产后心内膜炎死亡。这时,慢慢的,人们才发现原来GBS是可以致命的人类致病菌。


GBS是一种革兰氏阳性球菌,青霉素是它的“天敌”;GBS属于兼性厌氧菌,在有氧的环境中生长繁殖较好,在无氧环境中也能维持基本的生存;GBS属于条件致病菌,即平常情况下寄居于人体的生殖道和直肠没有任何影响,一旦人体机能出现下降,健康状态较差,它就会显露狰狞的一面,上可侵犯宫颈、宫腔,下可影响生殖道、尿道和直肠。


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GBS在血平板上37℃培养24小时后,会形成灰白色、表面光滑、圆形、呈珍珠状的β溶血性菌落。


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GBS在镜下为链状排列,长短不一,与普通链球菌无异。


2、流行病学


研究表明,健康人群GBS带菌率可达15%~35%,然而带菌率会随人种、地域、年龄的不同而形成差异。东欧妇女带菌率为19.7%~29.3%,西欧为11%~21%,欧洲南部为6.5%~32%,而丹麦报道孕妇平均带菌率为36%。国内曾报道,孕妇带菌率约10.1%~32.4%。


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北京地区孕妇带菌率为7.1%,上海地区孕妇带菌率为3.7%,广东地区的为9.7%,还有桂林地区的7.5%,江西地区的8.76%,秦皇岛地区的9.5%,南京地区的4.2%以及山西地区的17.9%。


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3、 临床意义


GBS感染可导致孕妇早产、胎膜早破、绒毛膜羊膜炎、产褥感染、败血症等。据了解,GBS感染诱发早产率最高达60%,其主要发病机制为:孕妇感染GBS后,可促使前列腺素活化,并促进磷酸酯酶A2及炎性细胞因子的释放,刺激宫颈收缩导致早产。GBS感染是胎膜早破的主要因素,GBS对绒毛膜有较强的吸附能力和穿透能力,接种2小时内即可吸附于母体组织,继而侵入绒毛膜,通过炎症细胞的吞噬作用及细菌产生的蛋白水解酶的直接侵袭,使胎膜局部张力减低,从而导致胎膜早破。研究报道,GBS阳性的孕妇中有21%发生绒毛膜羊膜炎和产后子宫内膜炎,主要原因是孕妇胎膜破裂后其屏障作用消失,GBS继续上行至宫内,导致宫腔内感染,引起绒毛膜羊膜炎、子宫内膜炎等。产褥感染是指分娩时及产褥期生殖道受病原体感染,引起局部和全身的炎症反应。Daniels的研究曾指出有20%~25%的产褥感染由GBS引起,其中35%由GBS单独引起,65%与其他细菌混合感染导致。


GBS传播的主要途径为垂直传播,且与分娩有关,如果孕妇感染GBS,新生儿就可能在出生时吸入感染的羊水或通过产道时感染GBS。研究表明,围生期携带GBS的孕妇导致新生儿感染比非携带GBS的孕妇高25倍。值得一提的是,剖宫产不能避免新生儿感染GBS。新生儿感染GBS主要表现为早发型感染,以新生儿败血症为主要临床表现,会导致新生儿败血症,肺炎和脑膜炎,发病率和死亡率较高,也可能遗留长期病理状态如耳聋、视力受损、发育障碍以及脑瘫等。


4、相关的临床或实验室诊断方法


一般要求对孕妇同时采集生殖道和直肠样本,以提高GBS检出率。GBS筛查的方法有多种,主要分为微生物学法、免疫学法、分子生物学法三大类。


微生物学法

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免疫学法

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基因组学法

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小结:微生物学法直观、准确,但周期长;免疫学法快速,但准确性不高;分子生物学法快速、敏感、特异,但要求高、成本贵。


5、疾病诊疗指南、诊断金标准


2010年美国CDC发布《围生期B族链球菌感染筛查及防治指南》中推荐,应对所有孕妇于35-37孕周采集生殖道及直肠拭子进行筛查,结果阳性者进行预防性治疗。除美国外,欧洲、比利时、加拿大、日本、法国、德国等国家均建议采用普遍筛查方案。


2011年国内中华医学会妇产科学分会的《孕前和孕期保健指南(第1版)》提出:将孕晚期GBS筛查列为备查项目。


产品预期用途及检验原理


1、预期用途


B族链球菌核酸检测试剂,用于检测人体样本(如孕妇生殖道分泌物)中的B族链球菌核酸,临床上主要用于链球菌感染的辅助诊断。


2、检验原理


通过设计特异性引物和探针,采用荧光定量PCR技术对B族链球菌DNA进行定性检测。


同类产品上市情况及异同点



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分类及样本量



根据《体外诊断试剂注册管理办法》的有关规定,B族链球菌核酸检测试剂属于与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂,管理类别为6840 III类。


根据《体外诊断试剂临床试验技术引导原则》的有关规定,采用核酸扩增方法用于病原体检测的体外诊断试剂:临床试验总样本数至少为500例。为满足临床试验阳性样本满足统计学最低样本量要求,可以根据人群带菌率去预估。


病例入排标准



A.入选标准:

1) 妊娠35~37周孕妇;

2) 年龄18岁以上;

3) 试验前受试者充分知情,自愿签署知情同意书。


B.排除标准:

1) 样本收集时间不明确或病例信息不完整;

2) 样本采集不满足检测要求(如体积过少)。


C.剔除标准:

1) 样本量不足导致不能完成有效检测的病例;

2) 样本检测结果无效或者缺失的病例;

3) 因筛选有误导致入组的病例

4) 研究者确认不符合试验要求的入组病例。


参考文献



1.Verani JR, et al. MMWR Recomm Rep. 2010, 59:1-36.

2.Money D, et al. J Obstet Gynaecol Can. 2013, 35(10):939-951.

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5.Daniels J, et al. Health Technology Assessment 2009,13(42) .

6.中华医学会妇产科学分会产科学组.《孕前和孕期保健指南(第1版)》中华妇产科杂志,2011,46(2):150-153.

7.张利红,路媛媛,许华斌. 围产期B族链球菌的感染、耐药性及检测研究进展(综述)[J]. 医学基础与药学研究,2017,16(2):110-112.

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10.栗艳芳,孔路科. 山西省晋城市妊娠晚期孕妇B族链球菌带菌率分析[J]. 实用医科杂志,2018,25(5):520-521.



编辑:广州奥咨达医疗器械技术股份有限企业  IVD事业部



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